Питательные среды
Качество питательных сред является одним из важнейших факторов, влияющих на достоверность результата анализа. Жесткая регламентация приготовления питательных сред и выполнения комплекса процедур внутреннего контроля качества является неотъемлемой частью обеспечения достоверности, а также воспроизводимости и повторяемости результатов количественных микробиологических анализов.
На конечный результат качества готовой питательной среды может оказать влияние множество различных моментов. Поэтому контроль качества питательных сред должен осуществляться на всех этапах технологического процесса, начиная от момента закупки среды до непосредственного использования в анализе, и включать следующие этапы:
1. Проверку документации и визуальный контроль питательных сред при их получении.
2. Контроль условий и сроков хранения питательных сред.
3. Контроль питательных сред на этапе приготовления.
4. Контроль биологических свойств питательных сред.
5. Контроль на этапе использования питательных сред.
Применение питательных сред без подтверждения их качества не допускается. Результаты выполнения процедур контроля качества должны быть документально зафиксированы.
Приготовленные в лаборатории питательные среды должны быть промаркированы с указанием названия среды, даты ее приготовления. Дату приготовления питательной среды заносят в журнал приготовления и контроля питательных сред. Готовые питательные среды хранят при температуре 2 - 8 °C. Срок хранения готовой питательной среды не должен превышать срока, установленного изготовителем.
Для приготовления питательных сред и растворов, используемых при микробиологическом анализе, допускается применение химических веществ по степени чистоты не ниже ЧДА (чистая для анализа).
Основным фактором, определяющим качество и дальнейшую пригодность питательной среды, является правильность ее приготовления.
Приготовление сред должно осуществляться со строгим соблюдением рецептуры приготовления и условий стерилизации, определенных изготовителем.
Контроль питательных сред на этапе приготовления включает:
- оценку внешнего вида готовой среды;
- измерение pH питательной среды до и после автоклавирования;
- определение стерильности (отсутствия контаминации) готовой среды;
- постановку качественного контроля биологических свойств среды.
Оценку состояния работ по контролю питательных сред на этапе приготовления проводят на основании данных, зарегистрированных в Журнале приготовления, и контроля питательных сред. Контролю подвергают каждую серию приготовленной среды.
Измерение pH
Значение водородного показателя определяют с помощью pH-метров для агаризованных и жидких питательных сред. Определение проводят согласно инструкции по использованию приборов.
Величину водородного показателя измеряют у стерилизованной среды, а при работе с плотной средой измеряют у стерилизованной среды после ее отвердения. Результаты регистрируют в журнале.
Отклонение pH среды за пределы диапазона, указанного в паспорте, приводит к ухудшению ее биологических свойств, вплоть до полной непригодности.
Отклонения водородного показателя или другие проблемы с pH могут быть вызваны:
- перегревом, в том числе при стерилизации;
- недостаточным перемешиванием (менее 15 минут);
- использованием щелочного стекла;
- загрязнением емкостей, в которых готовилась среда;
- дистиллированной водой низкого качества.
Определение стерильности
Определение стерильности (для стерилизуемых сред) и отсутствия контаминации (для нестерилизуемых сред) проводят путем выдержки в течение 48 - 72 часов при температуре 35 - 37 °C.
Каждую новую приготовленную партию питательной среды подвергают контролю. Для проверки качества питательной среды от партии приготовленной продукции в пробирках, чашках Петри и флаконах составляют выборку. Объем составляемой выборки определяется в зависимости от общего количества приготовленных единиц в партии и должен соответствовать установленным нормам.
Контроль биологических свойств питательных сред
Контроль биологических свойств готовых питательных сред включает два этапа: качественный и количественный контроль.
Целью качественного контроля является выявление грубых нарушений технологии приготовления, приводящих к выраженному снижению ростовых и (или) дифференцирующих свойств.
В процессе качественного контроля оценивают принципиальную способность тестового штамма расти на данной среде, а также наличие характерных признаков для дифференциально-диагностических сред.
Качественный контроль среды проводят после каждой варки.
Количественный контроль позволяет выявлять относительные изменения (ухудшение) ростовых свойств из-за ряда причин, возникающих на этапах транспортирования, хранения, приготовления, стерилизации, а также при нарушении технологических требований в процессе производства питательных сред, в результате которых они оказываются менее эффективными. Количественный контроль также может служить инструментом выбора более эффективной среды среди продукции, предлагаемой на современном рынке.
Количественный контроль выполняется:
- при поступлении каждой партии среды (разные серии питательных сред одного производителя иногда имеют различие по качеству, поэтому контролю подлежит каждая серия среды поступившей партии) или используемых реактивов;
- за месяц до окончания срока годности среды.
Этапы контроля биологических свойств питательных сред фиксируются в журналах
Тестовый штамм
Эталонные (тестовые) штаммы следует получать из официально признанной коллекции микроорганизмов. Культуру тестового штамма готовят накануне исследования. Для этого ее высевают со среды хранения (например, с полужидкого агара) на пробирки со скошенным питательным агаром или специальной средой. Посевы инкубируют 18 - 24 часа при оптимальной для тестового штамма температуре. Из полученной суточной агаровой культуры готовят суспензию микроорганизма методом десятикратных разведений для количественного контроля. В случае необходимости (при длительном хранении) культуру необходимо предварительно освежить в мясо-пептонном бульоне (МПБ).
Для качественного контроля приготовление суспензии тестовой культуры не требуется.
В ГБУ Брянской области «Брасовская зональная ветлаборатория» за приготовление, хранение и контроль питательных сред отвечает ветврач бактериолог Марщакова О.В.
