Метод полимеразой цепной реакции (ПЦР)
Высоко технологичные лабораторные методы диагностики дают возможность выявить множество заболеваний животных на самых ранних стадиях. Одним из таких методов является метод полимеразой цепной реакции (ПЦР). Это один из самых новых и точных способов диагностики, он широко и успешно применяется в ветеринарии.
Метод ПЦР использует принципы молекулярной биологии. Его суть заключается в применении особых ферментов, которые многократно копируют фрагменты РНК и ДНК возбудителей болезни, которые находятся в пробах биоматериала.
ПЦР- анализ состоит из нескольких этапов. Первый этап это пробаподготовка- заключается в обработке исследуемого материала. На втором этапе проводится выделение наследственного материала- ДНК или РНК – из клеток. На третьем этапе проводится амплификация, то есть умножение количества специфических участков ДНК. Для этого используются тест-системы, которые являются специфическими для каждого возбудителя. Четверней этап ПЦР- диагностики заключается в проведении электрофоретической детекции продуктов ПЦР- ампликонов. Сейчас наиболее распространенным способом проведения анализа является ПЦР в реальном времени – этот метод практически не допускает ложноположительных результатов, к тому же срок обработки образцов при исследовании таким способом сокращается. Следует отметить, что для получения достоверного результата ПЦР – анализа необходимым условием является соблюдения правил отбора, хранения и транспортировки клинического материала. Несмотря на то, что ПЦР является очень чувствительным методом, желательно наличие определенного количества возбудителя в пробе.
Для ПЦР диагностики заболеваний на анализ берут разные виды биоматериала. Выбор зависит от типа инфекции. Взятие материала следует проводить в одноразовых не талькованных перчатках (так как тальк угнетает ПЦР). Кровь берут одноразовой иглой в одноразовую пробирку без антикоагулянта. Кусочки пораженных органов от павших животных отбирают в стерильные одноразовые контейнеры, или, в чистые стеклянные или пластиковые емкости. Так же материалом для исследования может служить: моча, фекалии, слюна, мокрота, соскобы, смывы.
Следует строго соблюдать температурные режимы хранения и транспортирования отобранного материала. Транспортирование осуществляют в термоконтейнере с охлаждающими элементами или термосе со льдом. При хранении материала более суток его необходимо заморозить при Т – 200С.
С 2012 года ПЦР диагностика вирусных и бактериальных заболеваний проводится в ГБУ Брянской области «Почепская ЗВЛ». За 2018 год в ЛДО ГБУ Брянской области «Почепская ЗВЛ» были проведены исследования на следующие болезни: АЧС, КЧС, ИРТ, ВД, ПГ-3, Блютанг, Шмаленберг, РРСС, ПВС, грипп птиц, ротовирусные, короновирусные инфекции.
На основании ПЦР анализа ветврач может точно определить заболевание и назначить эффективное лечение.
Полезные ссылки
