Диагностические исследования на лейкоз крс
У крупного рогатого скота проводится прижизненная диагностика на лейкоз. Диагноз устанавливают на основании эпизоотологических данных, клинических, патологоанатомических изменений и результатов лабораторных исследований, они включают серологические, гематологические и гистологические исследования, которые регулярно проводятся в ГБУ Брянской области «Новозыбковская зональная ветлаборатория».
Ежедневно в нашу лабораторию поступают пробы для исследования на лейкоз. Основу диагностики лейкоза крупного рогатого скота составляет серологический метод исследования – реакция иммунодиффузии в агаровом геле (РИД). Из числа положительно реагирующих по РИД животных (инфицированных ВЛКРС) с помощью гематологического и клинического методов, выявляют больных лейкозом. Больными признаются РИД – положительные животные, у которых при однократных гематологических исследованиях установлены изменения, характерные для данной болезни.
Серологический метод диагностики лейкоза КРС: У животных зараженных ВЛКРС, вырабатываются антитела к вирусным антигенам. Характерная особенность инфекции ВЛКРС – это появление специфических антител в крови через 2 – 8 недель после заражения и пожизненное сохранение в организме инфицированных особей. Серологическими методами ВЛКРС можно выявлять у животных только старше 6 месяцев, т.к. у телят, выпаиваемых молоком и молозивом инфицированных ВЛКРС матерей, имеются пассивно приобретённые материнские антитела, которые сохраняются до шестимесячного возраста. Метод реакции иммунодиффузии (РИД) основан на обнаружении в сыворотки крови животных специфических преципитирующих антител против вируса лейкоза крупного рогатого скота. Пробы крови для исследования отбирают не ранее, чем через 30 – суток после введения животным вакцин и аллергенов, у стельных коров – за 30 суток до и после отёла. Животные, сыворотки которых дали положительный результат в РИД, считаются заражёнными вирусом лейкоза, их необходимо исследовать гематологическим методом.
Гематологический метод: в периферической крови наблюдают количественные и качественные изменения клеток, особенно лейкоцитов, являющиеся одним из существенных признаков лейкоза. Метод заключается в количественной и качественной оценке лейкоцитов периферической крови животных, отнесенных по результатам РИД к группе инфицированных ВЛКРС.
При гематологическом исследовании осуществляют: подсчет количества лейкоцитов при помощи электронных счётчиков или в камере Горяева; дифференцированный подсчёт лейкоцитов в мазках (выведение лейкоформулы) или лимфоцитов при помощи фазово – контрастного микроскопирования крови в камере Горяева; оценку количества лейкоцитов и абсолютного количества лимфоцитов по «лейкозному ключу» .Объектом гематологического исследования является периферическая кровь, пунктаты костного мозга, селезенка, лимфоузлы. Кровь для этих исследований берут из ярёмной вены в пробирки с антикоагулянтом. В качестве антикоагулянта используют трилон Б из расчёта 1 капля 10 % раствора на 1 мл крови, гепарин, или 6 % раствор лимоннокислого натрия (1 капля на 1 мл крови). Стабилизированную кровь до исследования хранят в холодильнике при температуре 2 – 4 градуса С и исследуют не позднее, чем через 36 часов с момента взятия. Дифференцированный подсчёт лейкоцитов (выведение лейкоцитарной формулы) проводят при обнаружении повышенного их количества. Для этой цели готовят мазки крови, которые фиксируют в этиловом спирте и окрашивают по Романовского – Гимза. Лейкоцитарную формулу выводят по результатам дифференцированного подсчета 100 клеток в окрашенных мазках крови под микроскопом с иммерсионной системой. Количество отдельных элементов крови выражают в процентах. Животные относятся к категории больных по результатам однократного гематологического исследования. Животных, подозреваемых в заболевании лейкозом, подвергают дополнительному гематологическому исследованию через 1 – 2 месяца. При повторном подтверждении диагноза их считают больными.
Цитоморфологический метод: Сущность метода заключается в обнаружении в периферической крови и кроветворных органах накопления морфологически изменённых, преимущественно незрелых или патологических клеток. Мазки, приготовленные на предметных стёклах, а также препараты – отпечатки, приготовленные из материала, взятого при биопсии, или из кусочков органов при убое животного, фиксируют в спирте, окрашивают по Паппенгейму и исследуют под микроскопом с иммерсионным объективом при увеличении 90.Результаты считают положительными на лейкоз, если в мазках крови более 3 %, а в кроветворных органах более 10 % родоначальных, слабодифференцированных (пролимфоциты, лимфобласты, миелобласты) или опухолевых клеток, которые отличаются от нормальных по форме, величине, структуре и тождественны клеткам, образующим опухоли.
Полезные ссылки
