Антитела к возбудителю бруцеллеза в РИД
Бруцеллез (Brucellosis), хроническая инфекционная болезнь животных и человека, вызываемая бактериями группы Brucella; у многих животных проявляется абортом и задержанием последа.
Бактерий, вызывающих эту болезнь, обнаружил в 1886 году английский учёный Дэвид Брюс. В его честь их назвали бруцеллами, а заболевание — бруцеллёзом. К инфекции восприимчивы все виды домашних животных, а также человек.
Патогенными для человека являются три представителя рода бруцелл: возбудитель бруцеллёза мелкого рогатого скота (Brucella melitensis), возбудитель бруцеллёза крупного рогатого скота (Brucella abortus) и возбудитель бруцеллёза свиней (Brucella suis). Есть описанные случаи заболевания бруцеллезом после контакта с штаммами Brucella canis (эти случаи считаются редкими).
Лабораторный диагноз:
посев крови на питательные среды положителен в 50—70 % случаев у больных бруцеллёзом:
реакция Райта — положительна на 10-й день;
реакция Кумбса — диагноз хронического бруцеллёза;
2-меркаптоэтанол-агглютинитовый тест;
реакция Хеддлсона;
кожная проба Бюрне;
реакция связывания комплемента;
иммуноферментный анализ;
реакция иммунодиффузии;
роз бенгал проба;
выявление ДНК Brucella spp. методами амплификации нуклеиновых кислот (ПЦР).
Серологическая диагностика бруцеллеза заключается в обнаружении специфических антител в сыворотке крови животных в реакции агглютинации (РА) в пробирках, реакции связывания комплемента (РСК), реакции длительного связывания комплемента на холоде (РДСК), реакции иммунодиффузии с 0-полисахаридным антигеном (РИД), пластинчатой реакции агглютинации с роз бенгал антигеном (роз бенгал проба - РБП) и в молоке коров - кольцевой реакции (КР) и других реакциях, утвержденных в установленном порядке.
Реакция иммунодиффузии (РИД) с 0-полисахаридным антигеном (0-ПС антиген)
Метод используют для:
Прижизненной диагностики бруцеллёза у крупного и мелкого рогатого скота, северных оленей.
Дифференциации поствакцинальных антител от антител, которые образуются при заражении «полевыми» культурами бруцелл. Это особенно важно в хозяйствах, где проводится вакцинация.
Оценки эпизоотической ситуации в стаде или хозяйстве. Положительная РИД может служить индикатором активности очага болезни даже при однократном исследовании.
Выявления инфицированных животных, особенно среди тёлок и нетелей, в неблагополучных хозяйствах.
РИД основана на выявлении специфических антител, синтезирующихся в организме животных, инфицированных возбудителем бруцеллеза и способности антител и антигена диффундировать в агаровом геле. При взаимодействии они образуют нерастворимый комплекс, который визуально проявляется в виде линии преципитации.
Применение РИД с 0-ПС антигеном при диагностике бруцеллеза крупного рогатого скота
Для постановки РИД применяется тест-система, основой которой является 0-ПС антиген.
Для исследования используют сыворотки крови животных неконсервированные или консервированные. Мутные, проросшие, гемолизированные сыворотки крови исследованию в РИД не подлежат.
Постановка реакции
Реакцию иммунодиффузии выполняют в чашках Петри или на стеклянных пластинках различных размеров, в зависимости от количества проб. Для исследования 5 - 35 проб используют чашки Петри; до 11 - предметные стекла; до 35 - пластинки размером 6 х 9 см; при большом количестве исследуемых проб можно использовать стекла большего размера.
В центральную лунку вносят 20 мкл 0-ПС антигена, а в периферические - по 40 мкл исследуемых сывороток крови.
На каждой пластинке (стекле) или чашке Петри ставят контроль с положительной сывороткой.
Стекла (чашки Петри) после внесения компонентов помещают во влажную камеру (эксикатор) при 18 - 24°С.
Учет результатов
Учет результатов проводят визуально в косом проходящем свете с помощью осветителя ОИ-19 или аналогичного через 24 и 48 ч после постановки реакции.
Линия преципитации между лунками с антигеном и исследуемой сывороткой, сформировавшаяся через 24 ч, свидетельствует о положительной реакции.
Сыворотки крови, давшие линию преципитации через 48 ч, подлежат перестановке.
Линия преципитации, сформировавшаяся через 24 или 48 ч при перестановке, свидетельствует о положительной реакции.
Оценка реакции
При получении положительной РИД животное признают больным бруцеллезом.
Полезные ссылки
