Участие в семинаре-совещании на тему: «Реализация мероприятий, направленных на предотвращение распространения и ликвидацию очагов лейкоза КРС в хозяйствах всех форм собственности на территории Брянской области»
ГБУ Брянской области «Клинцовская зональная ветлаборатория» приняла участие в семинаре-совещании на тему: «Реализация мероприятий, направленных на предотвращение распространения и ликвидацию очагов лейкоза крупного рогатого скота в хозяйствах всех форм собственности на территории Брянской области». Была прочитана лекция «Роль и значение лабораторной диагностики при осуществлении оздоровительных мероприятий от лейкоза крупного рогатого скота», также во время практической части в КФХ «Ивантей О.И.» с. Мартьяновка Клинцовского района продемонстрирована последовательность и техника исследования стабилизированной крови от КРС на лейкоз гематологическим методом.
Лейкоз КРС – хроническая инфекционная болезнь, вызываемая вирусом лейкоза крупного рогатого скота. Лейкозом болеет крупный рогатый скот всех возрастов. Клинически болезнь проявляется чаще у животных в возрасте старше 4 лет. Болезнь протекает вначале бессимптомно, затем проявляется персистентным лимфоцитозом и (или) образованием опухолевидных разрастаний в кроветворных и других органах и тканях.
Возбудителем лейкоза крупного рогатого скота является опухолеродный РНК-содержащий вирус. Источник возбудителя инфекции – животное, зараженное ВЛКРС.
Факторами передачи являются кровь, молоко и другие секреты и экскреты, содержащие лимфоидные клетки, инфицированные ВЛКРС. Заражение может происходить при совместном содержании здоровых и инфицированных ВЛКРС животных.
Диагностические исследования на лейкоз проводят серологическими, молекулярно-биологическими, гематологическими, клиническими, патоморфологическими методами, методом биопробы. Основу диагностики лейкоза КРС составляет серологический метод исследования – реакция диффузной преципитации (РДП), иначе называемая реакцией иммунодиффузии в геле агара (РИД). Из числа положительно реагирующих в РИД животных (инфицированных ВЛКРС) с помощью гематологического метода выявляют больных лейкозом.
Метод основан на обнаружении в сыворотке крови животных специфических преципитирующих антител к антигенам вируса лейкоза крупного рогатого скота. Специфические антитела появляются в крови через 2-8 недель после заражения животного ВЛКРС и сохраняются в организме пожизненно. Серологическому исследованию на лейкоз подвергают животных в возрасте 6 месяцев и старше. Быки-производители всех категорий хозяйств подлежат исследованию на лейкоз серологическими методами не менее двух раз в год с интервалом 6 месяцев.
Пробы крови для исследований берут не ранее чем через 30 суток после введения животным вакцин и аллергенов, у стельных животных – за 30 суток до отела или через 30 суток после него. Сыворотки для исследования получают из крови испытуемого животного в количестве 2-3 мл и направляют в лабораторию с сопроводительным документом, в котором указывают название хозяйства, номер (кличку), возраст, пол, породу животного.
Кровь (для получения сыворотки) берут в бактериологические пробирки, выдерживают 1-2 ч в теплом месте (не выше 40оС). Для лучшего отделения сыворотки образовавшийся сгусток обводят в пробирке профломбированной после каждой пробы стальной спицей (проволокой). После этого пробирки выдерживают в течение20-24 ч при 4-10оС. Полученные пробы сыворотки сливают в пробирки Флоринского и маркируют. При невозможности быстрого исследования подготовленные сыворотки хранят в замороженном состоянии.
В зависимости от наличия специфических антител против антигенов ВЛКРС в испытуемой сыворотке реакцию оценивают, как положительную или отрицательную. Животных, сыворотки крови которых дали положительный результат в РИД, признают зараженными вирусом лейкоза, и их необходимо исследовать гематологическим методом. Материалом для исследования методом иммуноферментного анализа (ИФА) может служить сыворотка крови, секрет вымени сухостойных коров, молозиво и молоко.
Пробы молока, молозива и секрета вымени сухостойных коров получают из любой доли вымени. Обнаружение в молоке, молозиве и секрете вымени сухостойных коров антител к вирусу лейкоза крупного рогатого скота позволяет сделать заключение об инфицированности животных этим вирусом.
Иммуноферментный анализ основан на иммунохимической реакции взаимодействия антиген-антитело и использования в качестве индикатора этой реакции маркированных ферментами антител или антигенов. Существует две модификации иммуноферментного анализа: непрямой и конкурентный. Гематологический метод исследования заключается в подсчете количества лейкоцитов в единице объема крови (1 мкл) и качественной оценке лимфоидных элементов – лимфоцитов. Гематологическому исследованию подвергают животных, в сыворотке крови которых серологическим методом (РИД, ИФА) обнаружены специфические антитела к ВЛКРС.Объектом гематологического исследования являются периферическая кровь, пунктаты костного мозга, селезенки, лимфоузлов.
Гематологические исследования позволяют выявлять больных животных, а также проводить дифференциальную диагностику форм и стадий болезни. Кровь для гематологических исследований берут из яремной вены в пробирки с антикоагулянтами. В качестве антикоагулянтов используют трилон Б из расчета 0,1 мл 10%-ного раствора на 1 мл крови, гепарин (5 ед. на 1 мл крови) или 6%-ный раствор лимоннокислого натрия (0,1 мл на 1 мл крови).
Для предотвращения свертывания крови содержимое пробирки сразу же тщательно перемешивают. Стабилизированную кровь до исследования хранят в холодильнике при температуре 2-4оС и исследуют не позднее чем через 36 час с момента взятия.
При массовых гематологических исследованиях можно ограничиться подсчетом клеток в 25 квадратах. С левого верхнего угла сетки (по 4 квадрата в каждом ряду) по диагонали вниз направо подсчитывают количество клеток в 20 квадратах. Затем по правой границе сетки поднимаются вверх и подсчитывают клетки в 4 квадратах в верхнем правом и в одном левом нижнем углах сетки. Число клеток в 25 квадратах следует умножить на 200.
При подсчете лейкоцитов необходимо обращать внимание на точность взятия определенного объема крови и разбавления ее, зарядки камеры и подсчета клеток.
Мазки готовят из нативной или стабилизированной крови на обезжиренных предметных стеклах. Окрашивают мазки в течение 20-30 мин краской Романовского-Гимза в специальных ваннах (можно в чашках Петри). Лейкоцитарную формулу (лейкограмму) выводят по результатам дифференцированного подсчета 100 клеток в окрашенных мазках крови под микроскопом с иммерсионной системой. При подсчете предметное стекло продвигают по зигзагообразной линии в направлении к концу мазка. Для счета дифференцированных клеток используют клавишный счетчик. Количество отдельных элементов крови в лейкоцитарной формуле выражают в процентах.
Абсолютное количество лимфоидных элементов в 1 мкл крови определяют путем умножения количества лейкоцитов на общий процент лимфоцитов и молодых клеток в лейкоцитарной формуле и деления полученного произведения на 100. Показатель абсолютного количества лимфоцитов оценивают затем по «лейкозному ключу».
Количество лейкоцитов и лимфоцитов в 1 мкл крови у здорового, подозрительного по заболеванию и больного лейкозом крупного рогатого скота дает основание, согласно «лейкозному ключу», оценивать статус животного по лейкозу. Животных относят к категории больных по результатам однократного гематологического исследования.
Животных, подозрительных по заболеванию лейкозом, подвергают через 1-2 месяца дополнительному гематологическому исследованию. При повторном подтверждении диагноза их считают больными.
Полезные ссылки
