Полимеразная цепная реакция
Полимеразная цепная реакция – один из самых точных и быстрых методов исследования вирусов и микробов. С помощью ПЦР можно не только определить болезнь, но также ДНК и РНК вирусов. Еще одним важным достоинством является то, что эта методика позволяет выявить антитела, которые смогут победить вирус.
ПЦР – одна из важнейших методик, позволяющих правильно определять инфекционные заболевания на ранних стадиях. Этот вид диагностики позволяет уточнить диагноз, когда УЗИ и обычные клинические анализы не дают ответов на вопрос, какая болезнь мучает домашнее животное. Метод ПЦР был разработан сравнительно недавно, но к настоящему времени успел занять передовые позиции как в медицинской, так и в ветеринарной лабораторной диагностике инфекционных и инвазионных заболеваний. Анализ методом ПЦР основан на обнаружении в материале исследования небольшого фрагмента ДНК возбудителя той инфекции, которую подозревает врач. "Небольшой фрагмент ДНК" - это несколько сотен пар оснований ДНК - кирпичиков, расположенных в строго определенной последовательности, и потому образующих неповторимый узор. Для ПЦР-диагностики инфекций достаточно небольшого фрагмента, поскольку любая ДНК включает в себя не менее нескольких тысяч оснований.
При проведении ПЦР-анализа ведется поиск такого фрагмента ДНК инфекции, который специфичен только для данного микроорганизма. Это значит, что этот фрагмент ДНК "особенный" - он встречается только у этого микроба (или группы родственных микробов), но не встречается ни у одного другого микроба.
Следует отметить, что для получения достоверного результата ПЦР-анализа необходимым условием является соблюдение правил отбора, хранения и транспортировки клинического материала. Несмотря на то, что ПЦР является очень чувствительным методом, желательно наличие определенного количества возбудителя в пробе.
Взятие материала для ПЦР-исследования следует проводить в одноразовых неталькованных перчатках (так как тальк угнетает ПЦР). При взятии соскобов и смывов следует пользоваться одноразовыми стерильными зондами с повышенной адсорбцией (имеющими на конце щеточку), так как они отбирают оптимальное количество материала.
Соскобы и смывы со слизистых оболочек носа, ротовой полости, влагалища, конъюнктивы отбирают в одноразовые пластиковые микропробирки - эппендорфы - объемом 1,5 мл, в которые разлито по 0,5 мл стерильного физиологического раствора. Желательно не использовать зонды с ватными наконечниками. Следует также избегать отламывания кончика зонда в пробирку с физиологическим раствором, так как это затрудняет дальнейшую обработку и повышает риск перекрестной контаминации проб. Для получения необходимого количества материала достаточно вращать зонд в пробирке в течение 1-2 минут, избегая разбрызгивания жидкости. Проба должна быть мутной на вид, а при отстаивании в ней должен образовываться небольшой осадок.Забор крови проводят одноразовой иглой в одноразовый шприц или в стеклянную пробирку без антикоагулянта. При заборе в шприц, кровь из него аккуратно (без образования пены) переносят в одноразовую стеклянную пробирку. Возможно использование вакуумных систем («Vacuette») для забора крови.
Сперму отбирают в стерильные одноразовые пробирки или флаконы
Моча. Отбирают первую порцию утренней мочи в количестве не менее 20-40 мл в стерильный сухой флакон или пробирку.
Фекалии. Отбирают пробы массой 1-3 грамма из предварительно продезинфицированного и вымытого лотка, одноразовыми лопаточками переносят в стерильный флакон.
Кусочки пораженных органов от павших животных отбирают в стерильные одноразовые контейнеры или в чистые стеклянные или пластиковые емкости.
Следует строго соблюдать температурные режимы хранения и транспортирования отобранного материала. Транспортирование осуществляют в термоконтейнере с охлаждающими элементами или в термосе со льдом. Полученные образцы обычно можно хранить и транспортировать в следующих режимах:
- Цельная кровь, при температуре 2-8 С – в течение 12 ч с момента взятия материала.
Другие образцы:
- При температуре от 2 до 8 С - в течение суток;
- При температуре не выше минус 20 С- в течение месяца;
- При температуре не выше минус 68 С - длительно.
Допускается однократное замораживание-оттаивание материала.
Полезные ссылки
