Лабораторная диагностика бешенство животных

Бешенство - особо опасная болезнь теплокровных животных, характеризующаяся тяжелым поражением центральной нервной системы, атипичным поведением, агрессивностью, параличами, ведущая к летальному исходу. Обычно протекает в буйной форме (у большинства животных) или в тихой (не характерно для крупного рогатого скота).

Является зооантропонозом, представляя огромную опасность для человека.

Для лабораторной диагностики бешенства у животных используют несколько методов, которые основаны на обнаружении цитоплазматических включений или специфического антигена, а также на выделении рабического вируса. Диагноз на бешенство ставят при получении положительных результатов хотя бы по одному из методов лабораторного исследования.

Некоторые методы: световая микроскопия, метод иммуноферментного анализа (ИФА), биопроба на белых мышах и метод полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Микроскопия

Световая микроскопия — метод выявления в клетках нервной ткани специфических цитоплазматических включений — телец Бабеша-Негри. Для этого используют мазки-отпечатки ткани мозга на предметном стекле и окрашивание с помощью красок по Селлерсу, Гимзе и Манну.

Преимущества метода: экспрессность (45-60 минут). Недостатки: тельца Бабеша-Негри чаще обнаруживают в стадии выраженной клинической картины болезни, поэтому у вынужденно убитых животных они могут отсутствовать или присутствовать в виде единичных мелких включений. Кроме того, метод световой микроскопии обладает низкой чувствительностью — по данным некоторых авторов, тельца Бабеша-Негри выявляют лишь в 65-85% случаев бешенства, по данным других — лишь в 40%.

ИФА

ИФА — метод выявления антигена вируса бешенства. В основе метода — специфическое взаимодействие антигена с антителом, иммобилизованным на твёрдом носителе. Связанный антиген выявляется с помощью второго антирабического антитела, меченного пероксидазой, продукт реакции которой окрашивается при добавлении хромогена.

В качестве исследуемого материала используют пробы ткани головного мозга павших, вынужденно убитых, подозреваемых в заболевании бешенством или экспериментально заражённых вирусом бешенства животных.

Биопроба

Биопроба — метод выделения вируса бешенства на белых мышах путём введения им суспензии патологического материала с последующей идентификацией вируса методом флуоресцирующих антител.

Некоторые особенности метода:

Заражение проводят под наркозом путём интрацеребрального введения 0,03 мл суспензии исследуемого материала.

При наличии в исследуемом материале вируса бешенства у мышей возникает тремор мышц, параличи. В большинстве случаев животные погибают в течение пяти дней.

Наличие вируса бешенства в заражённых и погибших мышах необходимо подтвердить с помощью прямой реакции иммунофлуоресценции или обнаружения телец Бабеша-Негри.

Недостатки биопробы: продолжительность исследования (в отрицательных случаях — до 30 дней), потенциальная опасность выноса возбудителя, а также невозможность использования разложившегося материала.

ПЦР

ПЦР — метод выявления генома вируса бешенства путём перевода специфической последовательности РНК вируса в ДНК с последующим многократным копированием полученной ДНК и обнаружением продуктов реакции.

Один из широко используемых методов — обратиотранскриптазная полимеразная цепная реакция (ОТ-ПЦР). Она состоит из двух этапов: синтеза комплементарной ДНК и амплификации гена или его фрагментов.

В большинстве случаев ПЦР применяют для штаммовой дифференциации вируса бешенства.

• Вперёд